PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用於放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA複製。其特點是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學研究和實驗的常規方法,PCR實驗室廣泛應用於生物學各個領域。
PCR實驗室主要實驗項目:艾滋病檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫物證等等。
一、PCR實驗室平麵布局
PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本製備區、擴增反應混合物配製和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉汙染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即隻能從試劑貯存和準備區→標本製備區→擴增反應混合物配製和擴增區→擴增產物分析區。
各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。PCR實驗室平麵布置示意圖如下所示

如使用全自動分析儀,區域可適當合並。
二、實驗室空調通風係統設計及壓力控製
PCR實驗室並沒有嚴格的淨化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉汙染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控製送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。
2.1試劑貯存和準備區
該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的製備、試劑的分裝和主反應混合液的製備。試劑和用於樣品製作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,並在本區內製備成所需的貯存試劑。
對與氣流壓力的控製,本區並沒有嚴格的要求。
2.2標本製備區
該區域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。
本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠汙染。另外,由於在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的汙染,所以應避免在本區內不必要的走動。
2.3擴增反應混合物配製和擴增區
該區域主要進行的操作為DNA擴增。此外,已製備的DNA模板 (來自樣本製備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和製備區)製備成反應混合液等也可在本區內進行。
本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的汙染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超淨台內進行。
2.4擴增產物分析區
該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。
本區是最主要的擴增產物汙染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
三、汙染的預防與控製
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免汙染。在實際工作中,常見的有以下幾種汙染類型:擴增產物的汙染;天然基因組DNA的汙染;試劑的汙染以及標本間的汙染。由於一旦發生汙染,實驗就必須停止,直到找到汙染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生汙染後再圍繞實驗室來尋找汙染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免汙染,首先應是預防,而不是排除。
3.1工作區域的嚴格劃分
(1)各個實驗區域設置合理;
(2)各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地麵顏色等),以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。
3.2合理的係統設置
(1)合理的空調通風係統設置,盡量采用全送全排的空調係統;
(2)嚴格的氣流壓力控製,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。
3.3 規範的操作
(1)擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格後才能從事臨床基因擴增檢驗的工作;
(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,並經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止汙染的措施;
(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束後,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表麵進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。
3.4嚴格的管理
(1)嚴格控製進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門;
(2)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉汙染的可能性。
(3)擴增產物分析區是最主要的擴增產物汙染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒後在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒後統一處理,如焚燒等;
(4)擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。
3.5完備的實驗室配套設施
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超淨工作台、離心機、加樣器等。
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